我也不知道,全部都照著做,可是這次就是長不出colony
你應該能確定有切好吧 我明天帶點F牌給你 反正我們用到只剩喳喳 但我上周還用過 one shot!!
丁丁林 我終於看懂ㄌ 是axitinib 不過反正要等pazopanib
我認為有切出來,因為Vect出來2個band都是確定的
恭喜妳長出來ㄌ 我只剩下最後一個爛招 就是insert灌爆 拿去vaccum dry
只長一顆......我還有一組都不長 =_=
所以妳認為要多濃哇....我elute出來是4~7*10ng/ul...我不覺得是太稀捏,總覺得是黏不起來
還是NOT1切PCR product很難???
GCGG滑掉嗎 XD
insert 1ug vector0.5ug 差不多是25:1 XD 體積很大所以只能去vaccum dry 10U的enzyme 撐得住 但還可以做成30uL的size轉兩倍份量的competent cell
應該還好啦 就撞久一點 你可以使用classical 14-16C O/N
對ㄌ 你的primer阿 RE site外面多加幾個mer?? 我會放3-4個 NotI 推薦4ㄍ 大不了你給老師30元 因為太多mer XD
我也是懷疑外面太少....我都一視同仁只加一個 冏rz
噢降不行 就連我的好朋友EcoR1 BamH1 Hind3都加三個 Not1這麼大隻任的site有8ㄍ 月台只有1個mer站不住!!! 只加一個digestion efficiency會只有10%
我上一個BamHI也只加一個...難怪我產能這麼低 哈哈
你可以試試看喔 我向來加這麼多 XD 這是有根據的 只不過2003之後的NEB guide就刪除那張表格 但他也沒有進步阿 ~
我知道NEB那張表,但我想說F牌那麼厲害,就不管它了 冏>
你們RE也是F牌的阿 那我只能說 美國種的馬鈴薯也是馬鈴薯 不會比台灣的高級到哪去 哈哈 菌種一樣的 那個牌子的都差不多吧 至少不會有隱藏技能
你的primer阿 RE site外面多加幾個mer?? 我會放3-4個 NotI 推薦4ㄍ 大不了你給老師30元 因為太多mer XD